基于Epac1/VDAC1/NLRP3/Caspase信号通路探讨丹连心方对高脂血症心肌梗死大鼠心功能紊乱的改善机制

目的探析丹连心方（DLXF）对高脂血症心肌梗死大鼠心功能的改善作用及机制。方法该实验采用高脂饲料喂养8周构建高脂血症模型，再行左前降支结扎构建大鼠心肌梗死模型，经灌胃DLXF低剂量（1.108 g·kg^-1·d^-1）和高剂量（2.217 g·kg^-1·d^-1）4周后，观察DLXF对大鼠体征的影响，超声心动图观察心功能变化，病理学检查评价心脏形态变化，动态激光散斑血流成像系统观察肠系膜微血管情况，血清生化检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）等关键血脂指标，以及白细胞介素（IL）-1β、IL-6、氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞炎症因子的变化，分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测环磷酸腺苷调节鸟嘌呤核苷酸交换因子1（Epac1）、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白（VDAC1）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶（Caspase）-9、Caspase-3表达情况。结果DLXF组大鼠生存状态普遍有所改善。超声心动图结果显示，与模型组比较，高剂量组左心室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）均显著升高（P<0.01），各剂量组LVIDd、LVIDs均显著降低（P<0.01）。动态激光散斑血流成像结果显示，与正常组比较，高脂血症模型组的血流量明显降低（P<0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠肠系膜血流量显著增加（P<0.01）。血清生化结果显示，与模型组比较，DLXF低剂量组TC、TG明显下降（P<0.05），高剂量组TG明显下降（P<0.05）。各剂量组HDL-C水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。各剂量组VLDL水平显著下降（P<0.01），DLXF高剂量组低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著下降（P<0.01）。酶联免疫吸附测定法（ELISA）结果显示，与正常组比较，高脂血症模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、NT-proBNP水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，DLXF各剂量组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α明显下降（P<0.05，P<0.01），且各剂量组NT-proBNP显著降低（P<0.01）。组织病理学结果显示，与模型组比较，DLXF组心肌结构改善，纤维排列规整，炎性浸润减少，胶原增生减轻。线粒体超微结果显示，与模型组比较，各给药组的心肌细胞结构规整，肌原纤维排列有序，且线粒体排列改善、结构清晰。心肌细胞凋亡结果显示，与假手术组比较，高脂血症模型组心肌细胞排列紊乱，棕褐色凋亡细胞散在分布，凋亡细胞数较多，与模型组比较，各组发现散在不同程度的细胞凋亡，细胞形态发生改变，细胞凋亡减少。Real-time PCR、Western blot结果显示，与模型组比较，各给药组Epac1、VDAC1、NLRP3、Caspase-9、Caspase-3相关蛋白和mRNA的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论DLXF能够明显改善高脂血症心肌梗死后大鼠心脏状态，其作用机制可能通过Epac1/VDAC1/NLRP3/Caspase信号通路改善线粒体结构和功能，抑制炎症反应，从而改善心功能。

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向春蓉, 马静卓, 何轩辉, 陈恒文